Screening enzimatico basato sulla biomassa cromogenica insolubile: un test per valutare l'attività di degradazione degli enzimi che degradano la biomassa vegetale

La biomassa è una materia organica di origine vegetale composta principalmente da polisaccaridi complessi. Gli enzimi che degradano i carboidrati agiscono su questi polisaccaridi per produrre oligosaccaridi più piccoli.

Per valutare l'attività di degradazione di un enzima, iniziare prendendo diversi substrati di biomassa cromogenica insolubile - ICB presenti nei pozzetti di una piastra di reazione porosa. Questi substrati sono ottenuti dalla tintura di materiali di origine vegetale con un colorante specifico di clorotriazina. La biomassa risultante ha polisaccaridi complessi marcati con coloranti che fungono da substrato per l'attività enzimatica.

Ora, aggiungi una soluzione tampone contenente l'enzima idrolizzante dei carboidrati. Il tampone mantiene il pH per un'attività enzimatica ottimale. Posizionare la piastra di reazione su uno shaker e incubare. L'agitazione costante consente alle molecole dell'enzima di raggiungere il polisaccaride bersaglio nel substrato ICB.

Durante l'incubazione, l'enzima idrolizzante scinde i legami glicosidici covalenti all'interno dei polisaccaridi a catena lunga. La reazione produce oligosaccaridi solubili legati a molecole di colorante, che rimango