Saggio di legame dell'annessina V: una tecnica basata sulla fluorescenza per identificare gli eritrociti apoptotici tramite marcatura della fosfatidilserina

Durante determinate condizioni patologiche, gli eritrociti o i globuli rossi subiscono un restringimento cellulare accompagnato dalla traslocazione del fosfolipide di membrana - fosfatidilserina - dal lembo di membrana interno a quello esterno, portando alla morte cellulare programmata, all'eriptosi, innescando la fagocitosi cellulare mediata dai macrofagi.

Per misurare l'eriptosi indotta da ionofori in una popolazione di eritrociti umani isolata tramite il saggio di legame dell'annessina V, iniziare con gli eritrociti sospesi in un tampone privo di glucosio.

La deplezione del glucosio induce stress cellulare, attivando la proteina chinasi citosolica C, che successivamente attiva i canali del calcio e provoca l'afflusso di ioni calcio. Inoltre, i canali del potassio vengono attivati, causando efflusso di potassio e restringimento cellulare.

Successivamente, aggiungi lo ionoforo di calcio che forma un complesso stabile con ioni calcio extracellulari. Il complesso facilita l'ingresso citosolico degli ioni calcio attraverso la membrana cellulare, aumentando ulteriormente la concentrazione intracellulare di calcio. Questo, a sua volta, attiva la scramblase - un trasportatore bidirezion