Saggio in vitro di deplezione del glucosio: un metodo basato sulla fluorescenza per quantificare l'assorbimento cellulare del glucosio tramite la misurazione della deplezione extracellulare del glucosio

Il glucosio, una fonte primaria di energia cellulare, entra nelle cellule attraverso le proteine trasportatrici del glucosio della membrana cellulare. Il glucosio viene scomposto nel citoplasma cellulare in piruvato, attraverso la via glicolitica, generando energia attraverso l'adenosina trifosfato, o ATP, per il metabolismo cellulare.

Per misurare l'assorbimento intracellulare del glucosio, iniziare con una coltura aderente di fibroblasti in una piastra a più pozzetti. Sostituire il terreno con terreno privo di glucosio e incubare. Le cellule metabolizzano il glucosio disponibile per produrre energia, raggiungendo uno stato di carenza di glucosio.

Sostituire il terreno in una serie di pozzetti con terreni privi di glucosio contenenti insulina, uno stimolatore dell'assorbimento del glucosio e deossiglucosio fluorescente, un analogo del glucosio. Trattare un'altra serie di pozzetti con terreni privi di glucosio contenenti desossiglucosio fluorescente.

Durante l'incubazione, l'insulina stimola la traslocazione di ulteriori trasportatori di glucosio sulla membrana plasmatica, facilitando l'aumento dell'assorbimento di desossiglucosio fluorescente, in assenza di glucosio.

Il desossiglu