Saggio di vitalità della luciferasi basato su ATP: un metodo omogeneo per valutare il potenziale inibitorio della crescita degli agenti di prova su organoidi tumorali

L'adenosina trifosfato, ATP, la principale fonte di energia delle cellule, è vitale per diverse funzioni cellulari. Sotto stress, i livelli intracellulari di ATP sono influenzati negativamente, rendendo l'ATP un buon marcatore per le cellule metabolicamente attive e vitali.

Per iniziare, seminare la sospensione delle cellule tumorali in una micropiastra a parete nera a fondo trasparente per ridurre al minimo la dispersione della luce durante la misurazione dell'intensità della luce. La micropiastra è costituita da un rivestimento in idrogel che impedisce alle cellule di aderire alla piastra, consentendo l'interazione cellula-cellula e l'autoassemblaggio in organoidi tumorali, colture di tessuti tridimensionali che imitano il microambiente tumorale.

Quindi, trattare con un composto di prova. Il composto in esame interagisce con le cellule organoidi e, a seconda del suo potenziale inibitorio della crescita, può interrompere i processi metabolici che producono energia, con conseguente deplezione intracellulare dell'ATP.

Dopo il trattamento, aggiungere un reagente in un'unica fase comprendente detergenti, inibitori dell'ATPasi, l'enzima luciferasi, substrato specifico della luciferasi,