JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:59 min. • July 8th, 2025
Le proteine nucleari mal ripiegate prive di una struttura terziaria definita sono marcate con piccoli modificatori simili all'ubiquitina, SUMO e molecole di ubiquitina, che facilitano la loro degradazione da parte del sistema proteolitico, incluso il sistema ubiquitina-proteasoma, l'UPS.
In diverse malattie neurodegenerative, la disfunzione dell'UPS provoca l'accumulo e l'aggregazione di proteine nucleari mal ripiegate, portando alla morte neuronale.
Per studiare il tasso di degradazione delle proteine nucleari mal ripiegate in vitro, trattare una coltura di cellule di mammifero aderenti con una miscela comprendente un DNA plasmidico codificante una proteina mal ripiegata marcata con fluorescenza e un reagente di trasfezione.
Le cellule trasfettate con successo esprimono proteine mal ripiegate marcate con fluorescenza, a breve emivita, marcate con un segnale di localizzazione nucleare. Dopo il trasporto al nucleo, queste proteine mal ripiegate subiscono la SUMOilazione e l'ubiquitinazione e vengono trasferite all'UPS per la degradazione e la clearance delle proteine.
Dopo l'incubazione, sostituire il terreno con un terreno a bassa fluorescenza contenente cicloesimide. La cicloesimi
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici