Saggio Bioreporter: una tecnica sensibile che utilizza un sistema reporter bioluminescente per rilevare gli anticorpi SARS-CoV-2

Durante l'infezione da sindrome respiratoria acuta grave da coronavirus 2, o SARS-CoV-2, il dominio di legame del recettore della proteina spike del virus, RBD, si lega all'enzima di conversione dell'angiotensina 2 della cellula ospite, ACE2, facilitando l'ingresso delle cellule virali. In risposta, il sistema immunitario produce anticorpi che si legano all'RBD virale e impediscono l'ingresso cellulare, riducendo l'infettività virale.

Per rilevare gli anticorpi SARS-CoV-2 mirati agli RBD, assumere una sospensione bioreporter ricombinante composta da frammenti proteici di piccole dimensioni, fusi con l'RBD spike di SARS-CoV-2. Aggiungere gli anticorpi SARS-CoV-2 standard mirati agli RBD e le microsfere magnetiche leganti gli anticorpi.

Durante l'incubazione, la regione dell'anticorpo Fc si lega ai domini di legame Fc delle perle. Inoltre, il bioreporter ricombinante si lega agli anticorpi SARS-CoV-2 che hanno come bersaglio gli RBD legati alle perline.

Dopo l'incubazione, centrifugare la miscela. Rimuovere il surnatante non legato contenente bioreporter. Risospendere le perline legate nel buffer. Trasferire in una piastra a più pozzetti.

Aggiungere una soluzione contenente frammenti