Saggio degli anticorpi neutralizzanti AAV basato su cellule: una tecnica colorimetrica per rilevare gli anticorpi neutralizzanti contro specifici virus adeno-associati nel siero

I virus adeno-associati ricombinanti, rAAV, virus a DNA a filamento singolo geneticamente modificati, senza involucro, sono promettenti vettori genici terapeutici.

Gli rAAV si legano ai recettori della membrana cellulare bersaglio e subiscono l'endocitosi mediata dalla clatrina, facilitando la consegna nucleare del genoma rAAV e l'espressione genica terapeutica. Tuttavia, gli anticorpi neutralizzanti del sistema immunitario diretti contro i rAAV si legano allo specifico epitopo rAAV, interferendo con il legame della membrana cellulare, l'ingresso cellulare e il trasferimento genico.

Per rilevare gli anticorpi neutralizzanti contro specifici rAAV nel siero di pecora, in primo luogo, ottenere concentrazioni appropriate di siero diluito. Aggiungere AAV ricombinanti che esprimono il gene della fosfatasi alcalina placentare umana, hPLAP. Consentire agli anticorpi neutralizzanti di legarsi e neutralizzare gli AAV.

Trasferire questa miscela nei pozzetti di una piastra a più pozzetti contenente colture cellulari epiteliali umane aderenti. Dopo l'incubazione, gli AAV vanno incontro a endocitosi cellulare. Le cellule trasdotte esprimono hPLAP legato alla membrana cellulare. Tuttavia, gli AAV