Saggio di persister in vitro: un metodo per valutare l'effetto degli osmoliti sulla persistenza batterica

In caso di esposizione a condizioni ambientali dannose, un sottogruppo di batteri entra in uno stato di bassa attività metabolica, eludendo gli effetti dannosi. Questi batteri, chiamati persistenti, possono tollerare l'esposizione transitoria ad alte concentrazioni di antibiotici.

Per studiare l'effetto degli osmoliti - piccoli soluti organici - sulla persistenza batterica, in primo luogo, si ottiene una coltura cellulare batterica in fase esponenziale con persistenti preesistenti al di sotto del limite di rilevabilità, sospesi in terreno.

Quindi, trasferire la sospensione nei pozzetti contenenti osmolita di una piastra di microarray. Mantieni una serie di pozzetti senza osmolito come controllo. Sigillare la piastra con una membrana permeabile ai gas per consentire una rapida diffusione del gas per la crescita cellulare e l'incubazione.

Gli osmoliti nel mezzo a concentrazioni appropriate inducono stress osmotico, innescando alcune cellule a riprogrammare il loro metabolismo cellulare da una crescita rapida a una lenta, formando persistenti.

A questo punto, trasferire le cellule trattate con osmolito e le cellule di controllo in una piastra di dosaggio persistente contenente antibio