Saggio omogeneo di prossimità luminescente amplificato: un saggio di prossimità basato su perline per lo screening di piccole molecole che inibiscono le interazioni proteina-proteina

Nei sistemi biologici, la vicinanza di una proteina al suo partner specifico è un fattore determinante per il successo dell'interazione proteina-proteina. Con la presenza di piccole molecole inibitorie, queste proteine non possono avvicinarsi l'una all'altra, interrompendo le loro interazioni.

Per esaminare le molecole inibitorie per interrompere le interazioni tra due proteine - un chaperone e un co-chaperone - prendere una piastra multi-pozzetto contenente varie piccole molecole. Integra i pozzetti con perline donatrici con co-chaperoni attaccati alle loro superfici. Queste perle contengono fotosensibilizzanti per il saggio della chemiluminescenza.

Aggiungere un impasto di perle accettori coniugate alle sequenze peptidiche derivate dallo chaperone che si legano specificamente al co-chaperone. Le perle contengono un colorante a base di tiossino e fluorofori essenziali per la visualizzazione.

Nei pozzetti con molecole non inibitorie, elevate affinità tra i peptidi leganti chaperone e i co-chaperoni attraggono le perle accettore e donatrice. Mentre le perle rimangono distanti quando sono presenti inibitori.

Utilizzando un lettore a chemiluminescenza, studia l'interazione. Dopo l'ill