Il test di fagocitosi: una tecnica di immunocolorazione per visualizzare l'inghiottimento delle cellule apoptotiche nelle cellule embrionali di Drosophila melanogaster

I macrofagi sono cellule immunitarie specializzate che eliminano le cellule sottoposte ad apoptosi, la morte cellulare programmata per fagocitosi.

Per valutare l'inghiottimento delle cellule apoptotiche, iniziare con un vetrino contenente cellule embrionali di Drosophila fisse, compresi i corpi apoptotici inghiottiti dagli emociti, i macrofagi invertebrati.

Innanzitutto, trattare le cellule con un reagente bloccante che blocca i siti non specifici. Aggiungere anticorpi primari che legano i recettori di Croquemort - marcatori fagocitici degli emociti. Lavare via gli anticorpi in eccesso.

Aggiungere anticorpi secondari marcati con fosfatasi alcalina che si legano agli anticorpi primari. A questo punto, aggiungere un'appropriata soluzione di substrato cromogenico sul vetrino e incubare. Durante l'incubazione, la fosfatasi alcalina reagisce con il substrato cromogenico per produrre granuli colorati di viola negli emociti.

Successivamente, aggiungere una miscela di reazione comprendente la deossinucleotidiltransferasi terminale, l'enzima TdT e i nucleotidi legati alla digossigenina. La TdT catalizza l'attaccamento dei nucleotidi legati alla digossigenina alle estremità 3' OH esposte del