Saggio di efferocitosi cellulare fissa: un metodo per studiare l'assorbimento efferocitico delle cellule apoptotiche da parte dei macrofagi utilizzando la microscopia a fluorescenza

Le cellule sottoposte ad apoptosi - morte cellulare programmata - mostrano segnali eat-me sulla loro superficie cellulare, facilitando la degradazione da parte dei fagociti - cellule immunitarie specializzate. Questo processo di eliminazione delle cellule apoptotiche è chiamato efferocitosi.

Per eseguire il test di efferocitosi, prelevare innanzitutto una sospensione di cellule apoptotiche a doppia colorazione. Le superfici di queste cellule sono marcate con biotina e il citoplasma è marcato con un colorante per il tracciamento delle cellule, che identifica i materiali derivati dalle cellule apoptotiche.

Aggiungere la sospensione cellulare in una coltura di cellule macrofagiche aderenti, che funzionano come efferociti. Centrifugare, forzando il contatto tra macrofagi e cellule apoptotiche, e incubare.

I recettori efferocitici sui macrofagi si legano alla fosfatidilserina - un segnale mangia-me - sulla membrana cellulare apoptotica, facilitandone l'inghiottimento. Piccoli frammenti della cellula apoptotica vengono assorbiti all'interno di una vescicola legata alla membrana, chiamata efferosoma.

Ciò si traduce in una frazione efferocitata - parte della cellula apoptotica all'interno