JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 7:16 min. • July 8th, 2025
Gli ovociti nella profase-I della meiosi sono attivi trascrizionalmente; producono mRNA e li immagazzinano in una forma dormiente. Durante la maturazione, quando l'ovocita entra in metafase, gli mRNA immagazzinati vengono tradotti in proteine.
Per studiare la traduzione dell'mRNA, iniziare con ovociti di topo arrestati con profase I sospesi in una goccia di terreno. Posizionare la pipetta di supporto vicino a un singolo ovocita per tenerlo in posizione.
Prenda una pipetta per microiniezione contenente una miscela reporter. Questo mix contiene due tipi distinti di mRNA, uno che codifica per la proteina fluorescente gialla, o YFP - un reporter fuso con la regione 3'-non tradotta del gene bersaglio - e un mRNA poliadenilato che codifica per la proteina fluorescente rossa.
Iniettare la miscela reporter nell'ovocita. Incubare gli ovociti microiniettati in un terreno di maturazione integrato con cilostamide, un inibitore chimico che mantiene l'arresto della profase-I.
L'ovocita traduce l'mRNA poliadenilato fino a quando l'intensità della fluorescenza rossa raggiunge un plateau, mentre i livelli di mRNA codificante YFP privi di una coda di poliadenilazione rimangono tali.
Trasferire gli o
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici