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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:09 min. • July 8th, 2025
Per quantificare il contenuto di proteine solubili in un tessuto vegetale, in una provetta, iniziare con una quantità appropriata di tessuto vegetale liofilizzato macinato.
Aggiungere idrossido di sodio, un alcali, al tubo e sonicare. L'ambiente alcalino con le forze meccaniche disgrega le cellule, rilasciando contenuti intracellulari, comprese le macromolecole - proteine solubili e carboidrati. Incubare a temperature più elevate.
In presenza di calore, gli alcali causano l'idrolisi delle proteine, formando peptidi più piccoli e aumentando la solubilità delle proteine. Inoltre, i carboidrati vengono degradati.
Centrifugare il composto. Raccogliere il surnatante contenente proteine solubilizzate. Aggiungere acido cloridrico per neutralizzare il pH.
Trattare il campione con acido tricloroacetico, TCA. Il TCA distrugge l'involucro di idratazione che circonda le proteine, portando all'aggregazione e alla precipitazione delle proteine.
Centrifugare e rimuovere il surnatante contenente TCA. Lavare il pellet proteico con acetone ghiacciato per rimuovere eventuali residui di TCA, che potrebbero interferire con la stima delle proteine solubili.
Asciugare l'acetone all'aria. Risospendere il
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