JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:34 min. • July 8th, 2025
Il Toxoplasma gondii - un protozoo unicellulare - è un parassita anaerobio obbligato, che si riproduce solo all'interno delle cellule ospiti.
Per quantificare la crescita intracellulare del parassita utilizzando un test basato sulla luciferasi, prendere una sospensione di cellule del parassita che esprimono luciferasi, un enzima che produce luminescenza dopo reazione con il suo substrato. Aggiungere la sospensione a una coltura di fibroblasti del prepuzio umano e incubare per una durata adeguata.
Il parassita si lega ai recettori delle cellule ospiti e viene internalizzato attraverso un processo endocitico, formando un vacuolo parassitoforo. La struttura fornisce una nicchia per la riproduzione del parassita.
Dopo l'infezione, aspirare il terreno, rimuovendo i parassiti non internalizzati. Aggiungere un tampone di lisi contenente un detergente e luciferina, un substrato per la luciferasi. Il detergente nel tampone crea pori nella membrana cellulare e lisa completamente le cellule, con conseguente rilascio di luciferasi.
L'enzima rilasciato ossida le molecole di luciferina, emettendo luce. Misurare l'intensità della luminescenza per determinare l'attività della luciferasi. Utilizzan
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici