Saggio della luciferasi per studiare l'efficacia di sostanze chimiche antiparassitarie contro i parassiti

Il Toxoplasma gondii, un parassita protozoo, si riproduce esclusivamente all'interno di cellule ospiti animali nucleate. Invade le cellule ospiti attraverso il processo endocitico, formando un vacuolo parassitoforo. All'interno del vacuolo, il parassita ingerisce proteine citosoliche dell'ospite, acquisendo nutrienti per la crescita.

Per esaminare l'efficacia delle sostanze chimiche antiparassitarie sui parassiti all'interno delle cellule ospiti, prelevare una piastra di analisi contenente una coltura aderente di fibroblasti del prepuzio umano in più pozzetti.

Erogare quantità uguali di parassiti Toxoplasma che esprimono luciferasi, un enzima che produce luminescenza, in ciascun pozzetto. Incubare, permettendo ai parassiti di invadere le cellule ospiti e crescere all'interno del vacuolo parassitoforo.

Dopo l'incubazione, aspirare il terreno, rimuovendo i parassiti non ingeriti. Integrare i pozzetti con diverse concentrazioni di composto antiparassitario mirato alla cisteina proteasi e incubare.

Le molecole del farmaco entrano nella cellula ospite per raggiungere i parassiti. Una volta all'interno, il farmaco inibisce l'enzima cisteina proteasi del parassita, interrompendo l'acquisi