JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:40 min. • April 30th, 2023
Il Trypanosoma cruzi, un parassita intracellulare obbligato, invade le cellule ospiti dei mammiferi come tripomastigote - stadio di sviluppo flagellato, non proliferativo - e si differenzia in amastigoti non flagellati, che proliferano nel citoplasma per fissione binaria.
Dopo la proliferazione, gli amastigoti si differenziano nuovamente in tripomastigoti che interrompono le cellule ospiti per entrare in circolazione, provocando un'infezione sistemica.
Per valutare il potenziale citotossico in vitro di un farmaco antiparassitario in prova contro Trypanosoma cruzi, iniziare con una coltura di parassiti transgenici Trypanosoma cruzi - nello stadio di sviluppo desiderato - che esprimono stabilmente l'enzima β-galattosidasi.
Sospendere i parassiti in un mezzo adatto. Trasferire in una piastra a più pozzetti. Aggiungere concentrazioni appropriate del farmaco antiparassitario di prova. Incubare.
Il farmaco si diffonde passivamente attraverso le membrane del parassita e viene metabolizzato in intermedi tossici. Questi metaboliti entrano nei nuclei e causano danni al DNA, inibendo la sintesi proteica, inclusa la β-galattosidasi, con un impatto negativo sulla vitalità del parassita.
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