Test di calcificazione per misurare la concentrazione di calcio nelle cellule interstiziali della valvola aortica

I lembi valvolari aortici contengono una popolazione eterogenea di cellule interstiziali valvolari, o VIC, distribuite in tutti gli strati della matrice extracellulare. Dopo la stimolazione, i VIC si trasformano in osteoblasti, cellule che formano la matrice ossea.

Gli osteoblasti maturi secernono collagene e proteine della matrice ossea. Queste proteine aiutano gli osteoblasti ad attaccarsi alla matrice. Infine, gli ioni calcio intracellulari entrano nell'ambiente della matrice e, insieme ai fosfati, si depositano sotto forma di noduli mineralizzati, portando alla calcificazione della valvola aortica.

Per valutare la concentrazione di calcio nelle valvole aortiche calcificate, iniziare con una coltura di VIC in una piastra a sei pozzetti. Scartare il terreno di coltura, aggiungere un terreno osteogenico nel pozzetto e incubare.

Durante l'incubazione, l'insulina nel mezzo osteogenico stimola i VIC a differenziarsi in fenotipi osteogenici. Questi osteoblasti secernono proteine della matrice ossea e acido ascorbico nel mezzo osteogenico che li induce a formare una matrice extracellulare ricca di collagene.

Infine, il calcio intracellulare degli osteoblasti e i fosfati del mezzo forma