Saggio di morte neuronale per valutare la morte cellulare in un modello di epilessia ex vivo

L'epilessia – convulsioni spontanee e ricorrenti nel cervello – porta alla morte delle cellule neuronali.

Per studiare la morte neuronale in un modello di epilessia ex vivo, iniziare prendendo una fetta organotipica di corteccia rinale-ippocampo - preparata dal cervello di un cucciolo di ratto - in un mezzo appropriato.

La fetta organotipica è costituita dalla corteccia rinale e dall'ippocampo. In condizioni di graduale deprivazione sierica, queste regioni raffigurano eventi epilettici in evoluzione, che portano alla morte neuronale indotta da convulsioni.

Aggiungere la quantità necessaria di ioduro di propidio, PI - un colorante fluorescente - alla coltura e incubare. Attraverso la membrana cellulare danneggiata, il PI entra nei neuroni morti e si lega al DNA; i neuroni vivi, con membrana intatta, non sono in grado di captare PI.

Posizionare la fetta organotipica su un vetrino da microscopio per l'immunocolorazione. Aggiungere la soluzione che blocca la permeabilizzazione e incubare.

Le molecole detergenti nella soluzione solubilizzano i lipidi di membrana, creando pori nella membrana delle cellule intatte, rendendole permeabili per le successive fasi di immunocolorazione. Le prot