JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:57 min. • July 8th, 2025
Per suscitare una risposta immunitaria, gli antigeni si legano agli anticorpi specifici per i recettori endocitici presenti sulla superficie delle cellule dendritiche, o DC - le cellule presentanti l'antigene - che aiutano nell'assorbimento degli antigeni.
La formazione di un complesso anticorpo-antigene è un passaggio cruciale e può essere realizzata in vitro accoppiando chimicamente l'antigene a un anticorpo monoclonale mirato alla DC.
Per verificare l'efficienza del processo di coniugazione, iniziare con una piastra ELISA prerivestita con gli anticorpi catturati. Trattare la piastra con una soluzione bloccante per evitare il legame aspecifico degli antigeni alla superficie rivestita.
Aggiungere alla piastra coniugati anticorpo-antigene reticolati chimicamente e incubare. L'epitopo specifico dell'antigene interagisce con il paratopo dell'anticorpo catturato formando un complesso anticorpo-antigene-anticorpo.
Quindi, sovrapporre la piastra con una terza serie di anticorpi legati a un enzima. Questi anticorpi si legano specificamente agli anticorpi primari presenti nel coniugato, consentendone il rilevamento.
Aggiungere un tampone contenente il substrato cromogenico per visualizzar
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