JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:04 min. • July 8th, 2025
I trasportatori di amminoacidi sono proteine legate alla membrana che mediano il trasferimento di aminoacidi attraverso le membrane cellulari, regolando i processi cellulari vitali.
Per studiare l'assorbimento degli aminoacidi in vitro, prelevare una coltura di cellule stromali derivate dal midollo osseo di topo. Aspirare il terreno di coltura. Aggiungi un tampone preriscaldato integrato con glutammina – un amminoacido – marcato con idrogeno radioattivo. Incubare per la durata richiesta.
Il tampone preriscaldato fornisce la temperatura fisiologica e un pH appropriato necessario per l'assorbimento cellulare della glutammina. I trasportatori della glutammina sono costituiti da domini di trasporto, responsabili della traslocazione del substrato tramite co-trasporto accoppiato a ioni sodio, e domini di scaffold ancorati alla membrana.
Il dominio di trasporto si lega alla glutammina radiomarcata insieme agli ioni sodio dal tampone. Dopo il legame, rilascia le molecole nel citoplasma. Contemporaneamente, il dominio di trasporto trasloca gli ioni sodio intracellulari e gli amminoacidi neutri all'esterno della cellula, determinando l'omeostasi cellulare.
Lavare le cellule con un tampone gh
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