JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:00 min. • July 8th, 2025
La glicogeno sintasi – un enzima cruciale nella sintesi del glicogeno – scinde il glucosio uridina difosfato, o UDP-glucosio – uno zucchero nucleotidico – in UDP e residuo glicosile e aggiunge il monomero di glucosio rilasciato alla catena del glicogeno in crescita.
Per stimare l'attività della glicogeno sintasi, iniziare assumendo una miscela di reazione contenente glicogeno, UDP-glucosio, ATP, fosfoenolpiruvato e nicotinammide adenina dinucleotide, o NADH, in una provetta. Aggiungere l'enzima nucleosidico difosfato, o NDP, e un cocktail di enzimi piruvato chinasi e lattato deidrogenasi. Mescolare il contenuto e incubare.
Aggiungere un campione contenente glicogeno sintasi alla provetta per avviare la reazione enzimatica.
La glicogeno sintasi agisce sull'UDP-glucosio, generando UDP e un residuo glicosilico. L'enzima assorbe il monomero di glucosio libero e lo incorpora nella catena di glicogeno della miscela di reazione. In presenza di ATP, la chinasi NDP della miscela di reazione fosforila l'UDP inutilizzato, convertendolo in UTP e generando ADP.
L'enzima piruvato chinasi agisce sull'ADP e aggiunge un fosfato donato dal fosfoenolpiruvato della miscela di reazione per produrre ATP
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