Saggio di immunofluorescenza per valutare l'effetto delle proteine bersaglio sulla crescita dei neuriti

I neuroni in via di sviluppo estendono i processi citoplasmatici dai loro corpi cellulari attraverso la crescita dei neuriti per sviluppare dendriti e assoni, che sono essenziali per la comunicazione da neurone a neurone.

Per studiare l'effetto di una proteina bersaglio sulla crescita dei neuriti, prendere una piastra multipozzetto con un vetrino coprioggetti rivestito di poli-D-lisina alla base. La superficie del vetrino coprioggetti ha una coltura aderente di neuroni corticali primari derivati dal cervello embrionale di ratto.

Trattare i neuroni con una miscela contenente due tipi di plasmidi: un plasmide EGFP che codifica per la proteina fluorescente verde potenziata e un secondo plasmide che codifica per la proteina bersaglio in un reagente di trasfezione adatto.

Il reagente di trasfezione facilita l'ingresso dei plasmidi nelle cellule.

Dopo la trasfezione, entrambi i plasmidi vengono espressi, producendo proteine fluorescenti verdi e proteine bersaglio. L'espressione di EGFP conferisce fluorescenza verde alle cellule co-trasfettate.

Le proteine bersaglio con potenziale stimolante la crescita dei neuriti avviano la segnalazione cellulare, che promuove la riorganizzazione del ci