JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:20 min. • July 8th, 2025
La reazione a catena della polimerasi annidata, PCR nidificata, può amplificare selettivamente sequenze geniche specifiche.
Per rilevare una sequenza virale bersaglio, iniziare con una miscela master contenente primer esterni complementari a una regione di DNA più ampia contenente la sequenza virale mirata, dNTP e DNA polimerasi termostabile in un tampone appropriato.
A questo mix si aggiunge il DNA virale a doppio filamento, estratto dalle cellule infettate dal virus. Trasferire il tubo in un termociclatore; eseguire il primo ciclo di PCR.
Durante la denaturazione, il DNA a doppio filamento produce due modelli a filamento singolo. A una temperatura di ricottura appropriata, i primer esterni si legano alle sequenze target corrispondenti. Successivamente, la DNA polimerasi estende i primer utilizzando dNTP, producendo grandi ampliconi, contenenti la sequenza specifica all'interno del DNA amplificato.
Trasferisci questi ampliconi su un nuovo tubo. Integrare con una miscela master fresca contenente primer interni o nidificati mirati a una sequenza più piccola e più specifica all'interno del DNA amplificato più grande. Esegui la seconda PCR.
Durante la seconda PCR, il filamento di DNA
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