Tecniche di PCR

Questo video dimostra il ruolo della reazione a catena della polimerasi digitale nell'identificazione della mutazione indel in un campione di DNA. L'elevata precisione e sensibilità della ddPCR consentono di rilevare in modo accurato e coerente le mutazioni rare presenti in un campione, anche a bassi livelli. È in grado di identificare e quantificare le mutazioni indel in diverse regioni del genoma, fornendo preziose informazioni sui meccanismi di mutazione e sulle conseguenze funzionali di...

Questo video mostra la reazione a catena della polimerasi in gradiente per l'ottimizzazione della temperatura di ricottura dei primer, che imposta la temperatura di ricottura in gradiente lungo i pozzi. L'effetto delle diverse temperature di ricottura è determinato dalla resa di prodotti amplificati che aiutano a ottimizzare la condizione di reazione.

In questo video, dimostriamo la tecnica della PCR digitale duplex (ddPCR), una modifica della tradizionale tecnica PCR utile per rilevare contemporaneamente due diversi marcatori genetici. Una singola reazione PCR viene suddivisa in goccioline emulsionate di dimensioni nanolitrometriche che vengono amplificate in modo indipendente e il rilevamento di segnali di amplificazione della fluorescenza di colore diverso dalla frazione di goccioline viene utilizzato per calcolare la concentrazione...

Questo video mostra un metodo quantitativo per rilevare l'infezione virale utilizzando la PCR a trascrizione inversa in tempo reale. La fase di trascrizione inversa converte l'RNA in cDNA, che viene poi amplificato tramite cicli di PCR. La presenza di RNA virale nel campione è confermata dall'analisi delle curve di amplificazione e dissociazione del DNA ottenute dalla PCR.

Questo video descrive la reazione a catena della polimerasi bloccante di tipo selvaggio, o WTB-PCR, che rileva le mutazioni somatiche. La tecnica basata sulla PCR utilizza un acido nucleico bloccato, o LNA, un oligonucleotide che si lega al suo allele complementare wild-type e ne blocca l'allungamento. Il blocco consente selettivamente l'amplificazione di alleli mutanti di basso livello rispetto alle loro varianti wild-type nel campione.

In questo video, discutiamo della reazione quantitativa a catena della polimerasi, qPCR, per enumerare i batteriofagi T7 attraverso la quantificazione del DNA. Il colorante fluorescente nella miscela PCR si lega ai filamenti di DNA appena sintetizzati ed emette fluorescenza, che viene misurata.

Questo video descrive la tecnica di amplificazione del DNA a singolo filamento utilizzando microsfere polimeriche rivestite di oligonucleotidi in una reazione a provetta singola. Questo processo produce DNA puro a filamento singolo, che può essere ulteriormente utilizzato per il sequenziamento del DNA e l'analisi di microarray.

Questo video descrive la reazione a catena della polimerasi nidificata, una tecnica che consiste in due processi sequenziali di amplificazione PCR utilizzando due set di primer. Il primo set di primer è destinato alla ricottura delle sequenze a monte del secondo set, con conseguente amplificazione selettiva di specifiche sequenze geniche. Questa PCR è più sensibile e specifica di una normale PCR ed è ampiamente utilizzata come tecnica di rilevamento per varie malattie.

In questo video, descriviamo una tecnica di PCR di fusione ad alta risoluzione per determinare il polimorfismo di lunghezza di frammenti di DNA di varie lunghezze di sequenza, in base all'analisi della temperatura di fusione.

Questo video dimostra la tecnica di reazione a catena della polimerasi a goccioline multiplex per la quantificazione simultanea di regioni di DNA metilato in diverse popolazioni di globuli bianchi come biomarcatore precoce per la diagnosi clinica e la prognosi.

Questo video dimostra l'utilità della PCR digitale in un formato chip-in-a-tube per il rilevamento di variazioni di singoli nucleotidi nei campioni di DNA. Una singola reazione di PCR è suddivisa in camere che agiscono come reazioni PCR indipendenti e il rilevamento dei segnali di fluorescenza dai bersagli amplificati nelle camere viene utilizzato per calcolare la frequenza dell'allele variante nel campione.

Questo video dimostra la PCR digitale basata su chip, una variante della tecnica PCR digitale utile per rilevare rare varianti di trascrizione. La reazione PCR è suddivisa nelle camere di un chip nanofluidico, ognuna delle quali agisce come una reazione indipendente. La rilevazione di segnali di fluorescenza provenienti dalle camere con bersagli amplificati conferma la presenza di rare varianti di trascrizione nel campione.