Biorilevamento a effetto di campo basato su biosensore di grafene per rilevare le interazioni proteina-proteina

Le interazioni proteina-proteina, PPI, sono fondamentali nella regolazione della maggior parte dei processi biologici.

Per rilevare i PPI utilizzando il biorilevamento a effetto di campo, iniziare con un chip transistor a effetto di campo in grafene. Il chip comprende una superficie di grafene funzionalizzata con carbossile come canale semiconduttivo tra gli elettrodi sorgente e di scarico.

Incubare il chip con una soluzione fresca di carbodiimmide e N-idrossisulfosuccinimide, sulfo-NHS, in un tampone zwitterionico. Questo tampone crea un pH adeguato, consentendo alla carbodiimmide e al sulfo-NHS di attivare i gruppi carbossilici funzionalizzati del chip, formando esteri reattivi alle ammine.

Aggiungere la soluzione proteica target. Le ammine primarie reagiscono con gli esteri reattivi all'ammina, immobilizzando le proteine sul chip attraverso la formazione di legami ammidici. Aggiungere una soluzione di tempra contenente ammina per bloccare gli esteri reattivi all'ammina non legati, prevenendo il legame non specifico.

Inserire il chip nel lettore elettronico e calibrarlo con un tampone. Il lettore applica una tensione costante tra gli elettrodi. Viene misurato il flusso di corrent