Fotometria di massa per studiare le interazioni antigene-anticorpo a livello di singola molecola

Per rilevare le interazioni antigene-anticorpo utilizzando la fotometria di massa, incubare innanzitutto la concentrazione desiderata di antigeni e anticorpi purificati per il periodo di tempo richiesto, facilitando il legame antigene-anticorpo. Sulla base della stechiometria del legame dell'antigene, le regioni paratopiche di questi anticorpi possono avere un numero variabile di antigeni attaccati.

Far fluire nella soluzione contenente gli anticorpi liberi insieme ai complessi antigene-anticorpo attraverso una camera di flusso preassemblata. Fissare la camera sul tavolino del microscopio di un fotometro di massa. Quindi, dirigere il raggio laser attraverso la camera di flusso per ottenere un imaging ottimale.

A seconda del numero di antigeni attaccati a ciascun anticorpo, la massa molecolare dei complessi cambia. Queste variazioni di massa fanno sì che i complessi diffondano la luce in modo diverso.

I complessi con masse molecolari più elevate, in cui due antigeni sono legati a entrambi i paratopi di un singolo anticorpo, diffondono più luce rispetto ai complessi contenenti un singolo antigene. Inoltre, gli anticorpi liberi mostrano la minor quantità di diffusione della luce.

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