Spettroscopia di fluttuazione della fluorescenza per studiare l'interazione delle proteine a contatto cellulare

Le interazioni cellula-cellula, mediate dalle proteine sulle superfici cellulari vicine, possono essere studiate in cellule vive utilizzando un saggio di spettroscopia di fluttuazione a fluorescenza.

Innanzitutto, prendi colture cellulari separate che esprimono un recettore di adesione, una proteina transmembrana. Il recettore nelle cellule delle due popolazioni è marcato con proteine fluorescenti separate spettralmente. Queste etichette fluorescenti sono presenti sulla regione citoplasmatica del recettore, impedendo l'interferenza con l'interazione cellula-cellula.

Scartare il terreno e aggiungere la tripsina, facilitando il distacco delle cellule. Mescolare le due popolazioni cellulari e incubare, consentendo ai recettori delle cellule vicine di formare trans-interazioni omotipiche.

Posizionare le cellule sotto un microscopio confocale. Illuminare il campione utilizzando sorgenti laser di lunghezze d'onda appropriate, provocando l'emissione da entrambe le etichette fluorescenti. Localizza due celle vicine con segnali di fluorescenza di colore diverso a contatto.

Acquisisci una scansione lineare, perpendicolare alla regione delle membrane cellulari a contatto, utilizzando il canal