JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 6:05 min. • July 8th, 2025
La spettroscopia di risonanza magnetica nucleare, o NMR, consente il rilevamento dell'interazione proteina-proteina a livello atomico.
Per studiare le interazioni tra proteine globulari ed elicoidali, etichettare proteine globulari purificate wild-type o mutanti con 15N, un isotopo dell'azoto. In una provetta NMR, mescolare le proteine globulari marcate e le proteine elicoidali non marcate in un solvente contenente uno standard NMR. Inserire il tubo nello spettrometro NMR.
I magneti dello spettrometro generano un forte campo magnetico, allineando i 15nuclei proteici globulari marcati con N parallelamente al campo. Un impulso a radiofrequenza, o RF, eccita i 15N-nuclei per allinearsi in modo antiparallelo al campo.
La frequenza di risonanza è la frequenza di impulso richiesta per la transizione di 15N nuclei tra i due stati. La normalizzazione della frequenza di risonanza di 15N allo standard NMR misura lo spostamento chimico di 15N.
Il campo magnetico viene regolato per allineare i nuclei 1H, legati a 15N, parallelamente al campo. Gli impulsi RF vengono regolati e viene registrato lo spostamento chimico di 1H.
Durante le interazioni proteiche, l'ambiente chimico che circonda i resi
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici