Utilizzo del phage display per selezionare proteine con elevata affinità per una proteina target

Inizia la visualizzazione dei fagi aggiungendo una libreria di fagi ai pozzetti di una piastra a più pozzetti, rivestita con la proteina bersaglio. La libreria dei fagi contiene fagi geneticamente modificati, ognuno dei quali mostra una singola variante proteica fusa con una proteina di rivestimento sulla sua superficie. Incubare, consentendo al fago e alle proteine bersaglio di interagire.

I fagi con proteine con un'elevata affinità per la proteina bersaglio si legano alla proteina bersaglio. Lavare con un tampone, rimuovendo i fagi non legati. Aggiungere una soluzione acida, interrompendo le interazioni tra fago e proteina bersaglio, rilasciando fagi nella soluzione. Neutralizzare il pH della soluzione utilizzando un tampone, mantenendo la stabilità dei fagi.

Trasferisci i fagi in una provetta nuova. Incubare con una soluzione bloccante contenente proteine, prevenendo interazioni aspecifiche.

Trasferire i fagi in una sospensione di E. coli che si divide attivamente, infettando i batteri e avviando il ciclo di replicazione dei fagi. Integrare con fagi helper, che infettano i batteri, fornendo le proteine del mantello necessarie per confezionare i fagi della progenie. Trasferire la