JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:31 min. • July 8th, 2025
Le proteine regolatorie, come i fattori di trascrizione, riconoscono e si legano a specifiche sequenze di DNA nelle regioni promotrici, regolando l'espressione genica.
Per rilevare le interazioni specifiche tra fattore di trascrizione e DNA utilizzando il saggio di spostamento della mobilità elettroforetica, iniziare con una provetta contenente un fattore di trascrizione desiderato e specifiche sonde di DNA marcate con colorante fluorescente corto all'infrarosso in un tampone di legame. Incubare al buio, prevenendo il fotosbiancamento del colorante.
La forza ionica e il pH del tampone forniscono le condizioni adatte affinché il fattore di trascrizione identifichi e leghi specifiche sequenze di legame sulla sonda di DNA. Gli ioni magnesio nel tampone stabilizzano ulteriormente i complessi proteina-DNA.
Aggiungere un colorante di caricamento adatto alla miscela, aiutando a visualizzare la progressione dell'elettroforesi. Caricare questa miscela e le sonde di DNA nei pozzetti di un gel di poliacrilammide prefabbricato e non denaturante.
Eseguire l'elettroforesi al buio.
Il campo elettrico applicato fa sì che le sonde di DNA a basso peso molecolare, non legate e caricate negativamente
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