Immunoprecipitazione della cromatina per identificare i siti di legame delle proteine bersaglio sul DNA genomico

Per identificare i siti di legame di una proteina bersaglio sul DNA, iniziare con cellule precursori di oligodendrociti contenenti una proteina bersaglio reticolata a specifiche sequenze di DNA nella cromatina.

Trattare le cellule con un tampone di lisi contenente inibitori della proteasi. Il tampone di lisi lisa le cellule, mentre gli inibitori inattivano le proteasi per mantenere l'integrità dei complessi proteina-cromatina.

Sonicare il contenuto per tagliare i complessi in frammenti di cromatina più piccoli, con alcuni che trattengono la proteina bersaglio.

Centrifugare per pellettare i componenti della cella e trasferire il surnatante contenente frammenti di cromatina in una provetta nuova. Incubare con anticorpi anti-bersaglio che si legano specificamente alla proteina bersaglio sui frammenti di cromatina.

Integrare la provetta con microsfere magnetiche rivestite di proteina A che si legano alla regione Fc degli anticorpi pre-legati. Applicare un campo magnetico per precipitare selettivamente le proteine bersaglio legate agli anticorpi complessate con frammenti di cromatina.

Trattare i complessi di perline con un tampone di eluizione ad alto contenuto di sale per interrompere