Saggio di repressione genica reporter per studiare la regolazione traduzionale di un gene bersaglio

Le proteine leganti l'RNA, RBP, funzionano come regolatori post-trascrizionali legandosi alla regione di inizio della traduzione, TIR, dell'mRNA e reprimendo la traduzione.

Per studiare le interazioni RNA-RBP attraverso la repressione traduzionale di un gene reporter, prendere una coltura cellulare batterica contenente due plasmidi: il sito di legame e i plasmidi RBP.

Il plasmide del sito di legame codifica per un gene reporter fluorescente. Dopo la trascrizione, il TIR dell'mRNA risultante contiene un sito di legame dei ribosomi e una struttura a forcina, con una sequenza riconosciuta dalle RBP.

I ribosomi si legano al sito di legame sull'mRNA e destabilizzano la struttura a forcina, portando alla traduzione dell'mRNA e alla formazione di proteine reporter fluorescenti. Il plasmide RBP esprime un RBP chimerico fuso con una diversa proteina fluorescente. Un promotore inducibile controlla l'espressione della proteina chimerica.

Aggiungi l'induttore, che attiva un fattore di trascrizione che si lega al promotore, inducendo l'espressione proteica chimerica. L'RBP della proteina chimerica si lega alla struttura a forcina. Questo impedisce al ribosoma di legarsi all'mRNA, inibendo la tr