Citometria a flusso quantitativa per studiare le interazioni tra vescicole proteina e fosfolipidi marcate

Le interazioni proteina-fosfolipide sulla membrana cellulare sono cruciali per la regolazione di diversi processi cellulari.

Per rilevare le interazioni proteina-fosfolipide bersaglio in vitro utilizzando la citometria a flusso quantitativa, prelevare una provetta contenente una concentrazione desiderata di mimica della membrana cellulare - vescicole fosfolipidiche marcate con colorante lipofilo di dimensioni micron - in tampone.

Aggiungere in soluzione una concentrazione appropriata di diverse proteine bersaglio marcate in fluorescenza.

Iniettare la sospensione nel citometro a flusso. Impostare i parametri del sistema fluidico su una velocità di flusso bassa per consentire un tempo sufficiente per le interazioni proteina-fosfolipidi.

Quando le proteine marcate in fluorescenza e le vescicole fosfolipidiche interagiscono nel canale di flusso, la concentrazione di proteine legate alle vescicole aumenta.

Quando questi complessi passano attraverso i raggi laser da specifici canali di fluorescenza che forniscono lunghezze d'onda appropriate, si eccitano. Queste proteine eccitate e le vescicole fosfolipidiche nel complesso emettono i rispettivi segnali di fluorescenza al momento del rila