Saggio di modulazione del pH su doppi strati lipidici supportati per rilevare le interazioni proteina-fosfoinositide

Il fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato, o PIP2, è un fosfolipide fosforilato minore legato alla membrana. La fosfolipasi C, o PLC, con specifici domini di legame PIP2, si lega a PIP2, generando messaggeri secondari essenziali per diversi processi cellulari.

Per rilevare le interazioni PLC-PIP2 in vitro, iniziare con una piccola vescicola unilamellare, SUV, sospensione acida, comprendente PIP2 e una miscela di fosfolipidi, una delle quali è coniugata a un colorante fluorescente sensibile al pH.

Pipettare la soluzione in un tubo di ingresso microfluidico preassemblato e collegare il tubo di uscita. Trasferire e fissare il dispositivo su un tavolino per microscopio a fluorescenza. Per gravità, i SUV passano attraverso il pavimento a microcanali, costituito da un vetrino coprioggetti idrofilo.

I SUV si adsorbono sulla superficie del vetro, il pH della soluzione riduce la repulsione elettrostatica tra i due. I SUV interagiscono con la superficie, deformandosi e fondendosi per formare grandi vescicole.

A seguito di una copertura superficiale critica, le vescicole si rompono spontaneamente, formando un doppio strato lipidico supportato, SLB. Far passare un tampone attraverso il canale, rim