Spettroscopia NMR quantitativa dell'idrogeno all'interno della cellula per monitorare le interazioni proteina-ligando

Per monitorare le interazioni delle proteine bersaglio con i ligandi di test di piccole molecole in un ambiente cellulare nativo, iniziare con una provetta NMR riempita con un tampone contenente un tappo di gel alla base. Iniettare le cellule bersaglio che esprimono la proteina, incorporate nell'agarosio nel tubo NMR, formando strutture filiformi.

Caricare la provetta nell'unità di flusso di un bioreattore, fornendo un terreno di coltura per mantenere la vitalità cellulare. Inserire l'unità di flusso all'interno di uno strumento di risonanza magnetica nucleare o NMR.

Sotto un forte campo magnetico, i nuclei atomici degli atomi di idrogeno delle proteine si magnetizzano e si allineano parallelamente al campo, adattandosi a uno stato di bassa energia.

Applicare un impulso a radiofrequenza, facendo sì che i nuclei si allineino in modo antiparallelo al campo magnetico, consentendo loro di passare a stati di energia più elevata.

Dopo un breve impulso, i nuclei ritornano nella loro posizione originale, emettendo energia assorbita. Il rivelatore cattura questa energia, generando uno spettro NMR che rappresenta le frequenze di risonanza dell'atomo di idrogeno. Ogni picco spettrale corrispo