Calorimetria differenziale a scansione per studiare l'interazione tra aptamero e ligando termolabile del DNA
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 7:16 min. • July 8th, 2025
La calorimetria differenziale a scansione aiuta a studiare le interazioni biomolecola-ligando misurando il calore necessario per denaturare la biomolecola in assenza e presenza del ligando.
Per iniziare, prendi un riferimento contenente aptameri di DNA liberi - oligonucleotidi strutturati a singolo filamento - e un campione contenente aptameri termolabili legati al ligando. I leganti stabilizzano la struttura secondaria dell'aptamero.
Eseguire una scansione in avanti riscaldando le soluzioni. Al raggiungimento della temperatura di fusione, gli aptameri liberi si denaturano.
Gli aptameri stabilizzati con ligando si dissociano dai leganti e si denaturano a una temperatura relativamente più alta, causando un aumento della temperatura di fusione rispetto agli aptameri liberi. Ad alte temperature, un sottogruppo di ligandi ottiene una forma secondaria irreversibile con una bassa affinità di legame.
Successivamente, eseguire una scansione inversa raffreddando le soluzioni per riguadagnare la struttura dell'aptamero. Alla temperatura più bassa, i leganti iniziali e convertiti nel campione si legano agli aptameri.
Durante la seconda scansione in avanti, gli aptameri legati con una debole a
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