JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 6:27 min. • July 8th, 2025
Il saggio di legame competitivo identifica piccole molecole che interrompono le interazioni recettore-ligando legandosi in modo competitivo a un recettore bersaglio, inibendo il legame naturale del ligando.
Per identificare le interazioni di un recettore con il suo ligando naturale in presenza di un antagonista di una piccola molecola specifico del recettore, iniziare con una sospensione di cellule di linfociti T umani che esprimono il recettore bersaglio.
Aggiungere la sospensione cellulare ai pozzetti di una piastra multipozzetto contenente concentrazioni crescenti di antagonisti. Incubare. L'antagonista si lega al sito di legame ortosterico, il sito naturale di legame del ligando del recettore.
Aggiungere ai pozzetti una concentrazione fissa di ligandi naturali marcati in fluorescenza. Incubare.
A basse concentrazioni, gli antagonisti occupano pochi siti di legame ortosterici, consentendo il legame naturale del ligando ai recettori. Tuttavia, a concentrazioni più elevate, gli antagonisti occupano la maggior parte dei siti di legame ortosterici, consentendo un legame minimo ligando-recettore naturale.
Centrifuga per pellettare le cellule. Scartare il surnatante. Risospendere le c
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