Saggio reporter basato su ELISA per studiare l'interazione recettore-ligando nelle cellule BW

Per studiare le interazioni recettore-ligando, iniziare con una piastra multipozzetto contenente terreni con cellule bersaglio che esprimono ligandi di prova sulla loro superficie.

Aggiungi cellule BW di topo ingegnerizzate, una nuova popolazione di cellule B che esprime recettori chimerici legati alla membrana. I recettori chimerici comprendono il dominio extracellulare di un recettore specifico fuso con il dominio di segnalazione transmembrana e intracellulare del recettore delle cellule B.

I ligandi sulle cellule bersaglio interagiscono con il dominio extracellulare dei recettori chimerici delle cellule BW, causando l'attivazione del dominio di segnalazione intracellulare nelle cellule BW. Ciò innesca la segnalazione a valle e la produzione di citochine, molecole reporter secretorie che vengono rilasciate al di fuori delle cellule BW, che appaiono nei media.

Centrifugare la piastra. Trasferire il surnatante contenente citochine in una piastra ELISA pre-rivestita con anticorpi anti-citochine. Le citochine interagiscono con le regioni Fab degli anticorpi, portando alla loro immobilizzazione sulla superficie della placca.

Trattare la piastra con una soluzione bloccante per bloccare