Saggio di degranulazione dei mastociti per studiare l'effetto di una sostanza chimica bersaglio

I mastociti, globuli bianchi specializzati, contengono granuli secretori ricchi di enzimi lisosomiali, come la beta-esosaminidasi.

Per eseguire la degranulazione dei mastociti, un processo che coinvolge il rilascio di granuli secretori, iniziare con una piastra a più pozzetti contenente una sospensione di mastociti peritoneali murini pretrattata con immunoglobuline.

Trattare le cellule con una sostanza chimica bersaglio. La sostanza chimica bersaglio con potenziale stimolante interagisce con le immunoglobuline pre-legate sui recettori specifici dei mastociti. Questo attiva il movimento dei granuli contenenti beta-esosaminidasi sulla superficie cellulare, rilasciandola nella soluzione.

Centrifugare la piastra per pellettare le celle e trasferire il surnatante contenente enzima in un pozzetto vuoto di una piastra fresca. Trattare i pellet cellulari con un tampone di lisi per lisare le cellule e rilasciare il loro contenuto nel lisato, compresa la beta-esosaminidasi intracellulare.

Aggiungere il lisato contenente l'enzima in un altro pozzetto della stessa piastra a più pozzetti. Trattare entrambi i pozzetti con il substrato dell'enzima, p-nitrofenil-acetil-D-glucosamina, e incubare. G