Isolamento e coltura di cellule di Kupffer di topo

Le cellule di Kupffer sono macrofagi residenti localizzati nei sinusoidi epatici che aiutano a proteggere il fegato dalle infezioni.

Per isolare le cellule di Kupffer di topo, prendere un fegato di topo perfuso appena raccolto in un piatto di contenuto medio. La fase di perfusione epatica con la collagenasi digerisce la matrice extracellulare, causando la dissociazione delle cellule epatiche.

Rompere la capsula epatica per rilasciare le cellule epatiche dissociate, comprese le cellule parenchimali, PC e le cellule non parenchimali, NPC, comprese le cellule di Kupffer, le cellule endoteliali, le cellule stellate e gli eritrociti rimanenti.

Filtro per rimuovere i detriti. Eseguire la centrifugazione differenziale a bassa velocità sul filtrato per sedimentare selettivamente i PC. Raccogliere il surnatante contenente NPC. Centrifugare per concentrare le cellule.

Risospendere le cellule in terreno e stratificare su un gradiente di densità isotonico discontinuo con due strati di gradiente medio di diversa densità. Con la centrifugazione, le cellule si separano in base alla loro densità rispetto al mezzo di gradiente.

Raccogli il livello NPC arricchito all'interfase del livello gradiente.