Isolamento dei macrofagi dal ganglio della radice dorsale del topo mediante dissociazione meccanica

Il ganglio della radice dorsale, o DRG, è un gruppo di corpi cellulari neuronali lungo il midollo spinale che trasportano le informazioni sensoriali dal sistema nervoso periferico a quello centrale. La lesione dei nervi periferici provoca l'accumulo di macrofagi nel DRG e lo sviluppo di dolore neuropatico.

Per isolare i macrofagi vitali utilizzando un metodo privo di enzimi, prelevare il tessuto DRG di topo appena sezionato in un omogeneizzatore riempito con tampone ghiacciato per limitare lo stress cellulare. Usando un pestello, omogeneizzare meccanicamente il tessuto per rilasciare le cellule.

Filtrare attraverso un filtro cellulare per rimuovere i grumi cellulari e ottenere una sospensione a cellula singola nel flusso. L'omogeneizzato tissutale contiene neuroni e cellule non neuronali, che includono macrofagi e mielina fluttuante, la guaina isolante dei neuroni.

Aggiungere l'omogeneizzato filtrato in una provetta contenente un mezzo di gradiente di densità e centrifugare. Sotto la forza centrifuga, le cellule vitali con una maggiore densità di galleggiamento si depositano sul fondo del tubo per formare un pellet, mentre la mielina rimane sospesa. Scartare il surnatante.

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