Isolamento di cellule mononucleate del sangue periferico da Buffy Coats umani

Le cellule mononucleate del sangue periferico, PBMC, sono costituite da una popolazione eterogenea di cellule immunitarie specializzate, tra cui linfociti, monociti e cellule dendritiche.

Per isolare le PBMC, inizia con una provetta contenente un buffy coat umano appena ottenuto sangue. Il sangue del buffy coat contiene PBMC, insieme a granulociti con nuclei multilobati, eritrociti e piastrine sospesi nel plasma.

Sovrapporre con cura la sospensione buffy coat su un volume uguale di un mezzo di gradiente di densità con una densità specifica desiderata ottimale per la separazione di PBMC.

Durante la centrifugazione, i diversi tipi di cellule si separano in strati distinti, in base alla densità delle cellule rispetto al mezzo di gradiente. Inoltre, i polisaccaridi nel mezzo del gradiente di densità promuovono l'aggregazione e la sedimentazione degli eritrociti.

Gli eritrociti e i granulociti con densità più elevate sedimentano sul fondo della tuba, mentre il plasma, con la densità più bassa, forma lo strato più superficiale. Le PBMC, che hanno densità inferiori rispetto al mezzo del gradiente di densità, formano uno strato bianco torbido all'interfaccia del mezzo del gradiente plasma-