Isolamento e purificazione di cellule B da sangue periferico umano

Per eseguire la separazione immunomagnetica negativa delle cellule B, raccogliere il sangue periferico umano in una provetta contenente anticoagulante per prevenire la coagulazione del sangue. Aggiungere globuli rossi, globuli rossi, tampone di lisi per lisare i globuli rossi senza intaccare altre cellule del sangue.

Centrifuga per sedimentare le cellule del sangue intatte e più dense dai globuli rossi lisati meno densi, che rimangono nel surnatante. Scartare il surnatante. Risospendere il pellet in un terreno fresco.

Trasferire le cellule su una piastra di coltura. Incubare per consentire ai macrofagi e ai monociti di aderire alla piastra mentre le cellule non aderenti, comprese le cellule B, rimangono in sospensione.

Raccogliere le cellule in sospensione in una nuova provetta. Centrifugare per pellettare le celle e risospenderle in un tampone.

Aggiungere una soluzione cocktail contenente anticorpi biotinilati specifici per le cellule del sangue diverse dalle cellule B. Gli anticorpi si legano agli antigeni sulla superficie delle cellule non B, lasciando le cellule B non marcate.

centrifuga. Eliminare il surnatante contenente anticorpi non legati.

Aggiungere una soluzione di perle