Smistamento cellulare basato sulla citometria a flusso per diverse popolazioni di cellule B circolatorie

Sulla base dei loro recettori di superficie cellulare, le cellule B circolanti umane sono classificate come cellule B naive CD19-positive, cellule B di memoria CD19 e CD27-positive e plasmablasti CD19, CD27 e CD38-positivi.

Per ordinare queste popolazioni cellulari, prendere una sospensione di cellule B purificata. Incubare con anticorpi umani contro le immunoglobuline G. Gli anticorpi bloccano i recettori Fc delle cellule B, impedendo il legame degli anticorpi non specifici.

Aggiungere anticorpi marcati in fluorescenza che hanno come bersaglio CD19, CD27 e CD38.

Gli anticorpi anti-CD19 si legano ai recettori CD19 espressi ubiquitariamente sulle cellule B.

Gli anticorpi anti-CD27 si legano ai recettori CD27 espressi sulle cellule B di memoria e sulle plasmacellule plasmablastiche.

Gli anticorpi anti-CD38 si legano ai recettori CD38 espressi sulle plasmacellule dei plasmablasti.

Aggiungi un colorante fluorescente legante il DNA come marcatore di cellule morte.

Le cellule morte mostrano una perdita di integrità della membrana, consentendo l'ingresso cellulare del colorante e il legame con il DNA a doppio filamento; le cellule vive rimangono non colorate.

Centrifugare per rimuovere gl