Valutazione funzionale delle cellule B secernenti anticorpi mediante saggio ELISpot

Le cellule B che secernono anticorpi, o ASC, sono cellule B differenziate che secernono isotipi di anticorpi, tra cui IgG e IgM, per garantire la protezione contro i patogeni.

Per eseguire una valutazione funzionale delle ASC in vitro, iniziare con il test spot di immunoassorbimento enzimatico. Prendi una piastra ELISpot contenente una membrana di fluoruro di polivinilidene attivato alla base.

Incubare i pozzetti con frammenti di anticorpi policlonali contenenti esclusivamente regioni Fab senza la regione Fc dell'anticorpo. Ogni regione Fab ha un sito di legame per specifici isotipi di anticorpi - IgG o IgM, che consente l'identificazione di entrambi gli isotipi.

Durante l'incubazione, i frammenti di anticorpi si attaccano alla membrana, portando all'immobilizzazione.

Sovrapporre i pozzetti con soluzioni bloccanti per evitare legami non specifici. Seminare la piastra con cellule B attivate che secernono anticorpi e incubare. Le ASC secernono diversi isotipi, tra cui IgG e IgM, che si legano ai frammenti di anticorpi legati alla membrana.

Lavare la piastra con un tampone per rimuovere gli anticorpi secreti non legati. Trattare alcuni pozzetti con anticorpi di rilevamento coniugati c