JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:03 min • July 8th, 2025
Gli adipociti, o cellule che immagazzinano il grasso, sono le cellule predominanti del tessuto adiposo – che secernono adipochine – molecole di segnalazione immunitaria che regolano la risposta immunitaria.
Per generare adipociti in vitro, iniziare con una piastra multipozzetto contenente una coltura aderente di cellule stromali del midollo osseo di topo, BMSC, cellule multipotenti indifferenziate.
Trattare le cellule con un terreno di induzione degli adipociti contenente inibitori dell'enzima fosfodiesterasi e desametasone, un glucocorticoide sintetico, per innescare la differenziazione delle cellule.
Gli inibitori entrano nelle cellule e disattivano le nucleotidie cicliche fosfodiesterasi, enzimi essenziali per la degradazione dell'adenosina monofosfato ciclico, o cAMP. Questa inibizione si traduce in un aumento dei livelli intracellulari di cAMP, fondamentale per la differenziazione cellulare.
Il desametasone si lega ai recettori intracellulari nelle BMSC ed entra nel nucleo per attivare i geni coinvolti nella sintesi e nell'accumulo dei lipidi. Ciò induce la differenziazione delle BMSC in preadipociti, le cellule precursori degli adipociti maturi.
Sostituire il terreno di coltura esaurito con un mezzo di induzione fresco per mantenere i preadipociti. Dopo una determinata durata, trattare le cellule con un terreno di base adipocitario contenente glucosio e insulina elevati.
L'insulina si lega ai suoi specifici recettori di superficie cellulare e attiva la traslocazione dei trasportatori del glucosio sulla superficie cellulare, facilitando l'assorbimento del glucosio nei preadipociti. Le cellule utilizzano il glucosio in eccesso per sintetizzare le goccioline lipidiche, portando all'adipogenesi – il processo di accumulo dei lipidi – che promuove la differenziazione in adipociti maturi.
Trattare le cellule con un colorante colorante lipidico e osservarle al microscopio ottico. Gli adipociti maturi appaiono come cellule rotonde con più goccioline lipidiche rosse.
Per indurre la differenziazione degli adipociti con cellule staminali del midollo osseo, sostituire il terreno di coltura cellulare di una coltura cellulare confluente del midollo osseo con un terreno di induzione degli adipociti. Dopo due giorni di coltura, sostituire il surnatante con un terreno di induzione degli adipociti fresco, passando al terreno a base di adipociti il giorno 4. Il giorno 7, confermare che le cellule hanno accumulato goccioline lipidiche e che la visualizzazione del fenotipo è simile a quella degli adipociti maturi.