Riconoscimento del marcatore CD di cellule killer umane indotte da citochine mediante citometria a flusso
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:35 min. • July 8th, 2025
Le cellule CIK (Cytokine-induced Killer) sono popolazioni di cellule immunitarie eterogenee generate ex vivo da colture di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) stimolate con citochine specifiche e anticorpi monoclonali. Le cellule CIK comprendono popolazioni cellulari, tra cui le cellule NK-T CD3+CD56+, le cellule T CD3+CD56- e le cellule NK CD3-CD56+.
Per determinare la proporzione delle cellule CIK, iniziare con provette contenenti una sospensione cellulare CIK derivata da PBMC. Aggiungere gli anticorpi anti-CD3 e anti-CD56 coniugati a diversi fluorofori e la loro miscela alle provette designate. Aggiungere anticorpi di controllo dell'isotipo coniugati a fluorofori simili come anticorpi specifici in altre provette.
Gli anticorpi anti-CD3 e anti-CD56 marcati con fluorescenza riconoscono e si legano rispettivamente a CD3 e CD56 espressi su popolazioni di cellule CIK. Gli anticorpi di controllo dell'isotipo non sono specifici dell'antigene bersaglio, facilitando le misurazioni del segnale di fondo non specifico.
Pipettare le cellule in provette a fondo tondo con cappucci per filtri cellulari, che aiutano a rimuovere gli aggregati cellulari. Caricare le provette in un ca
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