Isolamento delle cellule di Sertoli immunoregolatorie dai tubuli seminiferi di topo

I tubuli seminiferi dei testicoli contengono cellule di Sertoli, che nutrono le cellule germinali. Le cellule di Sertoli sono collegate tramite giunzioni strette e sono saldamente attaccate alla matrice basale ricca di acido ialuronico. Questa disposizione delle cellule di Sertoli regola l'ingresso delle cellule immunitarie nel tubulo e protegge le cellule germinali in via di sviluppo dalla degradazione.

Per isolare le cellule di Sertoli, iniziare con una provetta contenente tubuli seminiferi parzialmente digeriti derivati da testicoli di topo. Questi tubuli mancano di cellule peritubulari, cellule muscolari lisce che circondano i tubuli seminiferi.

Trattare i tubuli con un cocktail enzimatico contenente ialuronidasi - essenziale per l'idrolisi dell'acido ialuronico - e DNasi.

Le ialuronidasi entrano nei tubuli e scindono l'acido ialuronico – un polisaccaride basale – avviando il distacco delle cellule di Sertoli dalla matrice basale e rilasciando le cellule germinali nella soluzione. La DNasi digerisce tutti i contaminanti del DNA dalla soluzione, prevenendo l'aggregazione cellulare.

Lavare i tubuli digeriti enzimaticamente con un tampone, rimuovendo gli enzimi residui, i framment