Isolamento selettivo di cellule T CD4⁺ Vδ1⁺ γδ da cellule mononucleate del sangue periferico umano

Le cellule T γδ esprimono i recettori delle cellule T, TCR, che comprendono catene gamma e delta con domini variabili e costanti.

Le cellule T CD4+ Vδ1+ - una sottopopolazione di cellule T γδ - co-esprimono la catena Vδ1 variabile e il co-recettore CD4. Queste cellule migrano nei tessuti infiammati e si transdifferenziano in cellule T CD4+ o CD8+ αβ funzionalmente mature, mediando una risposta immunitaria.

Per isolare le cellule T CD4+ Vδ1+ dalle cellule mononucleate del sangue periferico umano, le PBMC riprospendano le cellule in un tampone. Utilizzare un reagente che blocca l'Fc per bloccare i recettori Fc sulla superficie cellulare e prevenire il legame di anticorpi non specifici.

Aggiungere anticorpi anti-Vδ1 coniugati con il fluoroforo FITC, che si legano agli antigeni Vδ1 delle cellule T γδ. Incubare con microsfere magnetiche accoppiate ad anticorpi anti-FITC, che si legano al colorante FITC sugli anticorpi legati alle cellule T Vδ1.

Far passare la miscela attraverso una colonna magnetica per attirare le cellule T Vδ1+ legate a microsfere; le cellule T Vδ1- rimangono non legate e vengono successivamente espulse. Lavare con forza la colonna spingendo il tampone attraverso di e