Caratterizzazione di trappole extracellulari per macrofagi in campioni di tessuto polmonare di topo

Le trappole extracellulari dei macrofagi, MET, sono strutture simili a ragnatele rilasciate dai macrofagi per intrappolare ed eliminare gli agenti patogeni.

I MET comprendono fibre di cromatina extracellulare associate alla metalloproteinasi-9 della matrice, MMP-9 e all'istone citrullinato H3, H3Cit - una proteina istonica modificata in cui l'arginina viene convertita in citrullina.

Per caratterizzare i MET in sezioni di tessuto polmonare murino fissate in formalina e incluse in paraffina, in primo luogo, asciugare i vetrini. Immergere nello xilene per deparaffinare le sezioni. Utilizzare etanolo acquoso per reidratare le sezioni.

Riscaldare le sezioni per rompere i legami incrociati delle proteine indotte dalla formalina, esponendo gli antigeni bersaglio per il successivo legame degli anticorpi.

Aggiungere una soluzione contenente proteine per bloccare i siti di legame non specifici. Incubare con un cocktail di anticorpi primari anti-MMP-9, anti-H3Cit e anti-F4/80.

L'anticorpo anti-F4/80 si lega alla glicoproteina F4/80 della superficie cellulare dei macrofagi. Gli anticorpi anti-MMP-9 e anti-H3Cit si legano rispettivamente a MMP-9 e H3Cit nei MET. Aggiungere diversi anticorpi sec